Ras-GRF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422605

Übersicht

Rasgrf1 codiert für Ras-GRF1, einen calcium-/calmodulinregulierten Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der GTPasen der Ras-Familie aktiviert und neuronale Aktivität mit nachgeschalteter MAPK/ERK-Signalgebung koppelt. In der Maus trägt Ras-GRF1 zur synaptischen Plastizität, zu Lernen und Gedächtnis sowie zur aktivitätsabhängigen Genexpression bei, indem es Ras- und Rap-gekoppelte Signalwege moduliert; zusätzlich hat es in ausgewählten Geweben Funktionen in insulin-/IGF-assoziierter Signalgebung und der Wachstumskontrolle. Über diese Signalknoten beeinflusst Ras-GRF1 zelluläre Proliferation, Differenzierung und Zytoskelettdynamik und ist damit relevant für Studien zu neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und zu fehlregulierter Ras-Signalweg-Biologie. Eine veränderte Ras-GRF1-Funktion wurde in Zusammenhängen aberranter neuronaler Signalgebung und onkogener Umgestaltung von Signalwegen untersucht, was seinen Einsatz als mechanistischen Einstiegspunkt zur Aufschlüsselung von Signalwegen stützt.

Das Ras-GRF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rasgrf1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rasgrf1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rasgrf1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ras-GRF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rasgrf1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ras-GRF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rasgrf1-Exone abzielen, die für die Ras-GRF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rasgrf1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ras-GRF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ras-GRF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rasgrf1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ras-GRF1 HDR-Plasmid (m) und Ras-GRF1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rasgrf1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rasgrf1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.