Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF1 (m): sc-422605

Présentation

Rasgrf1 code pour Ras-GRF1, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques régulé par le calcium/la calmoduline, qui active les GTPases de la famille Ras et couple l’activité neuronale à la signalisation MAPK/ERK en aval. Chez la souris, Ras-GRF1 contribue à la plasticité synaptique, à l’apprentissage et à la mémoire, ainsi qu’à l’expression génique dépendante de l’activité, via la modulation de voies liées à Ras et à Rap, avec en outre des rôles dans la signalisation associée à l’insuline/à l’IGF et le contrôle de la croissance dans certains tissus. Par l’intermédiaire de ces nœuds de signalisation, Ras-GRF1 influence la prolifération et la différenciation cellulaires, ainsi que la dynamique du cytosquelette, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de phénotypes neurodéveloppementaux et de la biologie des voies Ras dérégulées. Des altérations de la fonction de Ras-GRF1 ont été étudiées dans des contextes de signalisation neuronale aberrante et de remodelage de voies oncogéniques, ce qui en fait un point d’entrée mécanistique utile pour disséquer ces voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rasgrf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rasgrf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rasgrf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ras-GRF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rasgrf1 pour l'étude de la signalisation de Ras-GRF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rasgrf1 essentiels à la fonction de Ras-GRF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rasgrf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ras-GRF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ras-GRF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rasgrf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ras-GRF1 plasmide HDR (m) et le Ras-GRF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rasgrf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rasgrf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.