RAPGEF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403816

Übersicht

RAPGEF6 (auch bekannt als PDZ-GEF2) kodiert einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der die GTPasen Rap1 und Rap2 aktiviert und so rezeptorinitiierte Signale mit dem Zyklus kleiner GTPasen und der Aktivierung nachgeschalteter Effektoren verbindet. Über die Rap-abhängige Kontrolle des Integrin-Inside-out-Signalings, der cadherinvermittelten Adhäsion und der Organisation des Zytoskeletts trägt RAPGEF6 zur Regulation von Zellpolarität, Migration und Stabilität von Zellkontakten bei. Seine PDZ- und Ras-Associationsdomänen unterstützen Scaffold-Interaktionen, die die Signalübertragung an Membranen und in Adhäsionskomplexen koordinieren. Eine Fehlregulation der RapGEF/Rap-Signalübertragung wurde mit veränderten Phänotypen der Zelladhäsion und -motilität in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie, neuroentwicklungsbezogene Prozesse und das Trafficking von Immunzellen relevant sind.

Das RAPGEF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAPGEF6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAPGEF6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAPGEF6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RAPGEF6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAPGEF6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RAPGEF6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAPGEF6-Exone abzielen, die für die RAPGEF6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAPGEF6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RAPGEF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RAPGEF6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAPGEF6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RAPGEF6 HDR-Plasmid (h) und RAPGEF6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAPGEF6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAPGEF6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.