Plasmide Double Nickase (h) RANKL: sc-400304-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RANKL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RANKL Double Nickase (h) et le plasmide RANKL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TNFSF11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RANKL Antibody (G-1): sc-377079
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RANKL | sc-400304-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RANKL | sc-400304-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF11 code le ligand de l’activateur du récepteur de NF-κB (RANKL), une cytokine transmembranaire de type II, également soluble, appartenant à la superfamille du TNF, qui transmet ses signaux via TNFRSF11A/RANK afin de réguler la différenciation, l’activation et la survie des ostéoclastes. L’interaction RANKL–RANK déclenche les voies de signalisation NF-κB canonique et non canonique, ainsi que des programmes transcriptionnels dépendants des MAPK et de NFATc1, coordonnant le remodelage osseux et son couplage aux fonctions des cellules immunitaires. Une signalisation RANKL dérégulée est fortement associée à l’ostéolyse inflammatoire et aux processus de perte osseuse, notamment l’ostéoporose et l’érosion articulaire liée à la polyarthrite rhumatoïde, et contribue à des microenvironnements ostéolytiques associés aux tumeurs. Comme RANKL module également les interactions entre cellules dendritiques et lymphocytes T et le remodelage spécifique des tissus, TNFSF11 est largement étudié dans des modèles d’ostéo-immunologie et de biologie du squelette.
RANKL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNFSF11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNFSF11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNFSF11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNFSF11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.