Plasmide CRISPR/Cas9 KO RANKL (m): sc-423448

Présentation

Le gène murin **Tnfsf11** code **RANKL**, un ligand de la superfamille du TNF exprimé par les cellules stromales de la lignée ostéoblastique et par des cellules immunitaires activées. RANKL transmet son signal via son récepteur **RANK (TNFRSF11A)** afin de contrôler la différenciation, l’activation et la survie des ostéoclastes. L’interaction RANKL–RANK déclenche des programmes transcriptionnels dépendants de **NF-κB**, des **MAPK** et de **NFATc1**, essentiels au remodelage osseux, à l’organogenèse des ganglions lymphatiques et au dialogue entre cellules dendritiques et lymphocytes T. Sur le plan physiologique, l’activité de RANKL est contrebalancée par l’ostéoprotégérine (**OPG/TNFRSF11B**) et contribue au couplage entre l’activation immunitaire et le renouvellement squelettique. Une signalisation RANKL dérégulée est impliquée dans l’érosion osseuse inflammatoire, la perte osseuse liée à l’ostéoporose et les interactions ostéolytiques entre tumeurs et os, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques en ostéo-immunologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RANKL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfsf11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfsf11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfsf11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RANKL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfsf11 pour l'étude de la signalisation de RANKL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfsf11 essentiels à la fonction de RANKL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfsf11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RANKL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RANKL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfsf11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RANKL plasmide HDR (m) et le RANKL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfsf11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfsf11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.