Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral BP-1 (h): sc-402752

Présentation

RALBP1 code pour Ral BP-1 (également connu sous le nom de RLIP76), un effecteur multifonctionnel de RalA/RalB qui relie la signalisation des petites GTPases à l’endocytose, au remodelage du cytosquelette et au trafic membranaire. Ral BP-1 interagit avec des composants de l’internalisation dépendante de la clathrine et des complexes adaptateurs afin d’influencer le renouvellement des récepteurs et la dynamique vésiculaire, tout en contribuant aux réseaux de réponse au stress via le transport ATP‑dépendant de conjugués du glutathion et de métabolites xénobiotiques. Par ces activités, RALBP1 intervient dans des processus tels que la migration cellulaire, la progression du cycle cellulaire et la résistance cellulaire au stress oxydant et électrophile. Une expression ou une signalisation dérégulée de RALBP1 a été rapportée dans plusieurs contextes de cancers et est fréquemment étudiée en lien avec l’invasion, les voies associées aux métastases et la tolérance au stress cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral BP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RALBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RALBP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RALBP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ral BP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RALBP1 pour l'étude de la signalisation de Ral BP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RALBP1 essentiels à la fonction de Ral BP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RALBP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ral BP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ral BP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RALBP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ral BP-1 plasmide HDR (h) et le Ral BP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RALBP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RALBP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.