Plasmide CRISPR/Cas9 KO RAI15 (h): sc-405878

Présentation

SMYD5 code une méthyltransférase de lysine contenant des domaines SET et MYND, impliquée dans la régulation de la chromatine et le contrôle transcriptionnel, en soutenant des programmes dépendants du contexte qui façonnent l’identité cellulaire et les réponses au stress. En modulant la méthylation des histones et d’autres protéines, SMYD5 est liée à des voies épigénétiques qui influencent des processus dépendants de l’ADN, notamment l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication et la dynamique de l’expression génique. Une activité dérégulée de SMYD5 a été associée à une altération de la signalisation inflammatoire et à des états transcriptionnels oncogéniques dans plusieurs systèmes modèles, ce qui en fait une cible pertinente pour élucider les mécanismes de progression tumorale et les phénotypes liés à l’immunité. Dans les cellules humaines, l’exploration des réseaux dépendants de SMYD5 peut préciser comment les modificateurs épigénétiques intègrent des signaux pour réguler la prolifération et la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RAI15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SMYD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SMYD5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SMYD5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RAI15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SMYD5 pour l'étude de la signalisation de RAI15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SMYD5 essentiels à la fonction de RAI15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SMYD5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RAI15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RAI15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SMYD5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RAI15 plasmide HDR (h) et le RAI15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SMYD5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SMYD5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.