Rag C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424807

Descripción general

Rragc codifica Rag C, una pequeña GTPasa lisosomal que forma heterodímeros con RagA o RagB para acoplar la disponibilidad intracelular de aminoácidos al reclutamiento y la activación de mTORC1 en el lisosoma. Mediante interacciones con el complejo Ragulator y con efectores posteriores de mTORC1, Rag C ayuda a regular la síntesis de proteínas, la autofagia, la biogénesis lisosomal y la reprogramación metabólica en respuesta a señales nutricionales. La desregulación de la señalización de las GTPasas Rag puede alterar los puntos de control de detección de nutrientes y se ha implicado en fenotipos relevantes para el control proliferativo, la función de las células inmunitarias y la adaptación al estrés celular. En modelos murinos, Rag C sustenta estudios mecanísticos del crecimiento impulsado por mTOR y del equilibrio catabólico a lo largo del desarrollo y en contextos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rag C (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rragc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rragc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rragc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rag C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rragc para la investigación de la señalización de Rag C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rragc críticos para la función de Rag C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rragc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rag C CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rag C CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rragc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rag C (m) y el plásmido HDR Rag C (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rragc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rragc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.