Plasmide Double Nickase (h) Raf-1: sc-400202-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Raf-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Raf-1 Double Nickase (h) et le plasmide Raf-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Raf-1 Antibody (E-10): sc-7267
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Raf-1 | sc-400202-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Raf-1 | sc-400202-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAF1 code la kinase sérine/thréonine Raf‑1, un effecteur central de la signalisation RAS qui transmet les signaux issus des récepteurs tyrosine kinases activés vers la cascade MAPK/ERK. Raf‑1 régule la progression du cycle cellulaire, la différenciation, l’apoptose et les réponses au stress via la phosphorylation de kinases en aval, notamment MEK1/2, et l’activation consécutive d’ERK1/2. Une activité RAF1 dérégulée et une signalisation aberrante de la voie MAPK sont impliquées dans la transformation oncogénique et des mécanismes de résistance, et des altérations germinales ou somatiques de RAF1 ont été associées à des syndromes du développement ainsi qu’à des défauts de signalisation liés à la cardiomyopathie. En tant que nœud de signalisation intégrant des signaux de facteurs de croissance et des signaux inflammatoires, Raf‑1 est largement étudiée pour les interactions entre voies (crosstalk) avec PI3K‑AKT, la régulation par rétrocontrôle et le contrôle de l’activité kinase médié par des phosphatases.
Raf-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.