Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rad52: sc-401948-ACT

Le gène humain **RAD52** code Rad52, un facteur de réparation de l’ADN qui favorise la recombinaison homologue et l’appariement de simples brins afin de restaurer l’intégrité du génome après des cassures double brin. Rad52 participe à la réparation associée à la réplication et au redémarrage médié par la recombinaison, en coordination avec la résection des extrémités d’ADN et des processus dépendants de RAD51 au sein de la réponse globale aux dommages de l’ADN. Son activité influence la stabilité chromosomique, l’issue des événements de recombinaison et la sensibilité cellulaire au stress génotoxique. Des altérations de la fonction de RAD52 ou de la dépendance à RAD52 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes d’instabilité génomique observés dans plusieurs contextes de réparation associés au cancer, ainsi que dans des modèles de recombinaison homologue déficiente.

Rad52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAD52 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rad52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAD52 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAD52, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rad52. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAD52 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rad52 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rad52 dans les cellules tumorales présentant une expression de RAD52 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.