Plasmide Double Nickase (h) Rad51C: sc-403060-NIC

RAD51C code Rad51C, un paralogue de RAD51 qui intervient dans la recombinaison homologue et dans le réseau de réparation de l’ADN Fanconi–BRCA afin de résoudre les cassures double brin et les pontages interbrins. Rad51C participe à la dynamique des filaments de RAD51 et au traitement des jonctions de Holliday, contribuant à la stabilité des fourches de réplication et à l’intégrité du génome pendant les phases S/G2. L’altération de RAD51C est associée à des réponses déficientes aux dommages de l’ADN, à une instabilité chromosomique et à une sensibilité accrue au stress génotoxique, ce qui en fait un nœud clé des voies qui régissent la tolérance au stress de réplication. Ces propriétés relient RAD51C aux mécanismes à l’origine des prédispositions héréditaires au cancer et des troubles liés à la réparation de l’ADN, ce qui étaye son utilisation pour l’étude des phénotypes de maintenance du génome.

Rad51C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD51C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD51C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD51C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD51C.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.