Plasmide Double Nickase (h) Rad23B: sc-402106-NIC

Le gène humain **RAD23B** code la protéine Rad23B, un récepteur de l’ubiquitine et facteur de réparation de l’ADN qui couple la réparation par excision de nucléotides (NER) à la protéostasie via des interactions avec le protéasome 26S. Rad23B participe à la reconnaissance et au traitement des lésions de l’ADN déformant l’hélice et contribue au maintien du génome après des dommages induits par les UV et par des agents chimiques, tout en modulant la dégradation dépendante de l’ubiquitine par liaison à des substrats ubiquitinylés. Par ces fonctions, **RAD23B** soutient les réponses cellulaires au stress de réplication et les voies de signalisation des dommages à l’ADN qui influencent le contrôle du cycle cellulaire. Un dérèglement des voies NER et ubiquitine–protéasome impliquant **RAD23B** a été associé à une stabilité génomique altérée et à des phénotypes pertinents pour le cancer dans des modèles expérimentaux.

Rad23B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD23B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD23B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD23B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD23B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.