Rad21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422577

Übersicht

Rad21 kodiert eine zentrale Untereinheit des Cohesin-Komplexes, der die Kohäsion von Schwesterchromatiden stabilisiert und die höhergeordnete Chromatinstruktur organisiert. Durch das Beladen von Cohesin und dessen regulierte Freisetzung im Zellzyklus unterstützt RAD21 die korrekte Chromosomensegregation, die Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen und die Stabilität der Replikationsgabel und ist damit in Signalwege der Genomstabilität eingebunden. Die durch RAD21 vermittelte Chromatin-Schleifenbildung trägt zudem zur Transkriptionsregulation bei, indem sie Enhancer–Promotor-Kontakte sowie Interaktionen mit Faktoren wie CTCF koordiniert. Eine Störung oder Fehlregulation von Cohesin-Komponenten, einschließlich RAD21, ist mit chromosomaler Instabilität und cohesinassoziierten Entwicklungsphänotypen verbunden, wodurch Rad21 ein wichtiges Ziel für mechanistische Studien in Mausmodellen darstellt.

Das Rad21 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rad21-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rad21-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rad21 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rad21-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rad21-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rad21-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rad21-Exone abzielen, die für die Rad21-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rad21-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rad21 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rad21 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rad21-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rad21 HDR-Plasmid (m) und Rad21 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rad21-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rad21-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.