Plasmide CRISPR/Cas9 KO RACK7 (h): sc-411774

Présentation

ZMYND8 (RACK7) code un lecteur de chromatine qui se lie à des histones acétylées et méthylées via son module PHD–bromodomaine–PWWP afin de coordonner la régulation transcriptionnelle. RACK7 participe au remodelage de la chromatine et aux programmes de réponse aux dommages de l’ADN, intégrant les signaux issus des modifications des histones pour moduler l’activité des enhancers et la transcription dépendante de l’ARN polymérase II. Il a été associé à la régulation de la transition épithélio-mésenchymateuse, à des réseaux transcriptionnels liés à l’hypoxie, ainsi qu’au contrôle de l’expression de gènes inflammatoires via des interactions avec des complexes corépresseurs et de remodelage. Une dérégulation des voies de la chromatine associées à ZMYND8 a été rapportée dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par une instabilité génomique et une altération du contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RACK7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZMYND8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZMYND8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZMYND8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RACK7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZMYND8 pour l'étude de la signalisation de RACK7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZMYND8 essentiels à la fonction de RACK7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZMYND8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RACK7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RACK7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZMYND8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RACK7 plasmide HDR (h) et le RACK7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZMYND8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZMYND8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.