Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RACK1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420608-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RACK1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RACK1 Double-Nickase-Plasmid (m) und RACK1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rack1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RACK1: sc-17754
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RACK1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420608-NIC | 20 µg | $410.00 |
Rack1 kodiert den „Rezeptor für aktiviertes Protein-Kinase-C 1“ (RACK1), ein konserviertes WD40-Repeat-Gerüstprotein, das multiproteinhaltige Signalübertragungskomplexe organisiert und Rezeptorsignale mit nachgeschalteten Kinasewegen verknüpft. In Mauszellen assoziiert RACK1 mit PKC-Isoformen und integriert Signalübertragung über MAPK/ERK, Src-Familienkinasen und PI3K-assoziierte Netzwerke; zugleich wirkt es an der 40S-ribosomalen Untereinheit und moduliert die Translationsinitiation sowie die stressabhängige Proteinsynthese. Über diese Funktionen beeinflusst RACK1 Zelladhäsion, Polarität, Migration und die Progression des Zellzyklus, indem es Signalwege koordiniert, die fokale Adhäsionen und den Umbau des Zytoskeletts steuern. Eine fehlregulierte RACK1-abhängige Signalübertragung und Translationskontrolle wurde mit onkogenen Signalzuständen, entzündlichen Signalkreisläufen und veränderten Antworten auf zellulären Stress in Verbindung gebracht, was RACK1 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien macht.
RACK1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rack1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rack1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rack1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rack1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.