Plasmide Double Nickase (h) RACK1: sc-400800-NIC

Le récepteur de la protéine kinase C activée 1 (RACK1, également connu sous le nom de GNB2L1) est une protéine d’échafaudage conservée à répétitions WD qui organise des assemblages de signalisation multiprotéiques au niveau des ribosomes et des complexes associés à la membrane. Il coordonne les interactions entre la signalisation de la PKC, l’adhésion médiée par les intégrines/FAK, les voies MAPK et le contrôle de la traduction, influençant ainsi la croissance cellulaire, la migration et les réponses au stress. RACK1 a été impliqué dans la régulation du contrôle qualité associé aux ribosomes et de la traduction sélective des ARNm, reliant les signaux entrants au maintien de la protéostasie. Des altérations de l’expression ou de la localisation de RACK1 sont fréquemment étudiées dans le contexte de la signalisation oncogénique, de phénotypes associés aux métastases et d’interactions virus–hôte qui détournent la machinerie de traduction de l’hôte.

RACK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RACK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RACK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RACK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RACK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.