Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rac 1: sc-400175-ACT

RAC1 code la petite GTPase Rac1 de la famille Rho, un régulateur central de la dynamique du cytosquelette d’actine qui contrôle la formation des lamellipodes, la polarité cellulaire, le renouvellement des adhésions et la migration dirigée. Rac1 transmet des signaux via des effecteurs tels que les kinases PAK et le complexe WAVE/Arp2/3, en intégrant des signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase et des intégrines afin de moduler la signalisation MAPK, la production d’espèces réactives de l’oxygène et le trafic endocytaire. Par ces voies, RAC1 influence la prolifération, la survie et la fonction de barrière dans de nombreux types cellulaires. Une activité de RAC1 dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte de la signalisation oncogénique, de la motilité cellulaire associée aux métastases, des réponses inflammatoires et de phénotypes neurodéveloppementaux où le remodelage du cytosquelette et la plasticité synaptique sont altérés.

Rac 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rac 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rac 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rac 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rac 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de RAC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.