Plasmide Double Nickase (h) Rab GDI β: sc-404136-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rab GDI β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rab GDI β Double Nickase (h) et le plasmide Rab GDI β Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GDI2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rab GDI β Antibody (D-2): sc-515143
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rab GDI β | sc-404136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rab GDI β | sc-404136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI2 code l’inhibiteur bêta de dissociation du GDP des Rab (Rab GDI β), une chaperonne cytosolique qui se lie aux GTPases Rab prénylées et régule leur extraction des membranes ainsi que leur recyclage entre les compartiments de l’endomembrane. En contrôlant la disponibilité des Rab et leur adressage membranaire, Rab GDI β influence les événements de bourgeonnement, de transport et de fusion des vésicules, au cœur de l’endocytose, de l’exocytose et du trafic Golgi-vers-endosome. Cette régulation affecte le renouvellement des récepteurs, la dynamique de la voie sécrétoire et l’identité des organites au sein du cycle des GTPases Rab. Des dérégulations du trafic Rab et de la fonction des régulateurs des Rab sont impliquées dans les réponses au stress cellulaire et dans les altérations de la protéostasie observées dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, ce qui justifie l’utilisation de la perturbation de GDI2 pour explorer des phénotypes dépendants du trafic.
Rab GDI β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GDI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GDI2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GDI2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GDI2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.