Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab GDI β: sc-404136-ACT

GDI2 codifica el inhibidor beta de la disociación de GDP de Rab (Rab GDIβ), una chaperona citosólica que se une a las GTPasas Rab preniladas y controla su extracción de la membrana, su reciclaje y su transporte del citosol a la membrana. Al regular los ciclos de activación de Rab, Rab GDIβ sostiene vías de tráfico vesicular esenciales para la endocitosis, la exocitosis y la dinámica de los orgánulos, incluido el transporte del Golgi y endosomal. La alteración de la homeostasis de las GTPasas Rab y del control del tráfico se asocia con una señalización aberrante de receptores, la presentación de antígenos y la adaptación metabólica, procesos que con frecuencia están implicados en la biología del cáncer y de enfermedades neurodegenerativas e inflamatorias. Como coordinador central de la localización y disponibilidad de Rab, GDI2 se estudia habitualmente para vincular defectos en el tráfico de membranas con cambios posteriores en la señalización y el fenotipo celular.

Rab GDI β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GDI2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab GDI β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GDI2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GDI2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab GDI β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GDI2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab GDI β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab GDI β en células tumorales con expresión de GDI2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.