Plasmide Double Nickase (h) Rab GDI α: sc-404659-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rab GDI α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rab GDI α Double Nickase (h) et le plasmide Rab GDI α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GDI1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rab GDI α Antibody (C-7): sc-271846
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rab GDI α | sc-404659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rab GDI α | sc-404659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI1 code pour l’inhibiteur de dissociation du GDP Rab alpha (Rab GDI α), un régulateur cytosolique qui se lie aux GTPases Rab prénylées et contrôle leur extraction des membranes, leur solubilisation et leur acheminement vers des compartiments cibles au cours du trafic vésiculaire. En modulant le cycle des Rab entre des pools associés à la membrane et au cytosol, Rab GDI α contribue à coordonner le transport endocytique et exocytique, l’identité des organites et la dynamique membranaire dans des voies telles que le transport endosome-vers-Golgi et le recyclage des vésicules synaptiques. Une fonction correcte de GDI1 soutient les exigences de trafic neuronal, et une régulation altérée du transport dépendant des Rab a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et cognitifs. Dans les systèmes humains, GDI1 est fréquemment étudié comme un nœud reliant la signalisation des GTPases Rab à la protéostasie, au renouvellement des récepteurs membranaires et à la fidélité du transport spécifique des compartiments.
Rab GDI α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GDI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GDI1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GDI1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GDI1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.