Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab GDI α (h): sc-404659

Présentation

GDI1 code pour l’inhibiteur de dissociation du GDP des Rab alpha (Rab GDI α), une chaperonne cytosolique qui se lie aux GTPases Rab prénylées et régule leur extraction des membranes, leur solubilisation et leur recyclage entre les compartiments donneur et accepteur. En contrôlant la disponibilité et la localisation des Rab, Rab GDI α contribue à coordonner le bourgeonnement, le trafic et la fusion des vésicules au sein des voies endocytiques et sécrétoires, soutenant l’identité des organites et le tri des cargos. La perturbation de GDI1 dérègle les réseaux de trafic dépendants des Rab, essentiels au cycle des vésicules synaptiques et à l’homéostasie neuronale, reliant ainsi des altérations du transport membranaire à des phénotypes de maladies neurodéveloppementales et neurologiques. En tant que nœud central de la régulation des petites GTPases, GDI1 est fréquemment étudié dans le contexte de la dynamique des endosomes, du transport Golgi–membrane plasmique et de la fonction synaptique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab GDI α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GDI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GDI1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GDI1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rab GDI α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GDI1 pour l'étude de la signalisation de Rab GDI α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GDI1 essentiels à la fonction de Rab GDI α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GDI1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rab GDI α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rab GDI α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GDI1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rab GDI α plasmide HDR (h) et le Rab GDI α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GDI1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GDI1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.