Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rab 9A Double Nickaseプラスミド (h): sc-416915-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Rab 9A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Rab 9Aダブルニカースプラスミド（h）およびRab 9Aダブルニカースプラスミド（h2）は、RAB9Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Rab 9A 抗体 (Mab9): sc-53145
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Rab 9A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 9A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-416915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB9Aは小型GTPアーゼであるRab9Aをコードしており、後期エンドソーム輸送の主要な制御因子として、エンドソームとトランス・ゴルジ・ネットワーク（TGN）間のカーゴの選別と輸送を支えます。Rab9AはGDP結合型とGTP結合型の状態を循環することで、小胞の出芽、運動、係留といったイベントを協調し、受容体リサイクリング、リソソーム関連経路、膜恒常性の維持に重要な役割を果たします。Rab9A活性の変化は、エンドリソソーム輸送の破綻やオートファジー近傍のプロセスの異常と関連づけられており、これらは神経変性疾患や感染症の病態、ならびにがんに伴う細胞内輸送のリモデリングでしばしば関与が示されています。これらの機能により、RAB9Aは小胞輸送、オルガネラ間コミュニケーション、プロテオスタシスの機構解析研究に有用な標的となります。
Rab 9A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAB9A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAB9A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAB9Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAB9Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。