Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 7L1 (h): sc-403366

Présentation

RAB29 code Rab7L1, une petite GTPase de la famille Rab qui régule le trafic membranaire, avec des rôles importants au niveau du réseau trans-Golgi et des interfaces endosomales. Rab7L1 participe au bourgeonnement des vésicules, au tri des cargaisons et aux voies de recyclage, qui contribuent à l’homéostasie liée aux lysosomes et au positionnement des organites, grâce à des interactions coordonnées dépendantes du GTP avec des protéines effectrices. Dans les cellules humaines, RAB29 a été associé à des processus pertinents pour la biologie des neurones et des cellules immunitaires, notamment des voies impliquant la dynamique vésiculaire associée à LRRK2 et le trafic répondant au stress. La perturbation de la fonction de Rab7L1 est donc étudiée dans le contexte d’altérations du transport endolysosomal, du renouvellement des protéines et des sorties de signalisation impliquées dans des mécanismes liés à la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 7L1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAB29 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAB29, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAB29 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rab 7L1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAB29 pour l'étude de la signalisation de Rab 7L1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RAB29 essentiels à la fonction de Rab 7L1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAB29 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rab 7L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rab 7L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAB29. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rab 7L1 plasmide HDR (h) et le Rab 7L1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAB29 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAB29 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.