Particules Lentivirales d'Activation (h) Rab 44: sc-418677-LAC

RAB44 code pour Rab 44, une petite GTPase atypique de la famille Rab impliquée dans la régulation du trafic membranaire intracellulaire, la maturation des vésicules et la dynamique endolysosomale. En tant que protéine commutatrice alternant entre les états liés au GTP et au GDP, Rab 44 serait susceptible d’influencer l’identité des compartiments et l’acheminement des cargos, à l’interface des voies de sécrétion et de dégradation, y compris des processus associés à la fonction des cellules immunitaires et à la signalisation inflammatoire. Une activité dérégulée des GTPases Rab peut perturber le renouvellement des récepteurs, la présentation des antigènes et la transduction des signaux, faisant de RAB44 une cible pertinente pour l’étude du remodelage des voies dans les contextes de cancer et de maladies liées à l’immunité. L’étude fonctionnelle de RAB44 étaye des analyses mécanistiques reliant le contrôle du trafic aux états d’activation cellulaire, aux réponses au stress et à la protéostasie.

Les particules d'activation lentivirales Rab 44 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RAB44 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rab 44 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RAB44, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rab 44. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RAB44 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.