Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) Rab 27a: sc-401116-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rab 27a correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rab 27a Double Nickase (h) et le plasmide Rab 27a Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAB27A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rab 27a Antibody (E-8): sc-74586
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rab 27a | sc-401116-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rab 27a | sc-401116-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB27A code la petite GTPase Rab27a, un régulateur clé du trafic vésiculaire qui contrôle l’arrimage et la fusion des granules de sécrétion avec la membrane plasmique via des effecteurs tels que la mélanophiline et la machinerie de l’exocyste. Dans les cellules immunitaires, Rab27a coordonne l’exocytose des granules lytiques et la fonction cytotoxique, tandis que dans les mélanocytes elle soutient le transport des mélanosomes et la pigmentation. Ces processus recoupent la dynamique du cytosquelette, la fusion membranaire dépendante des SNARE et les voies de sécrétion régulée. Une activité dérégulée de RAB27A a été associée à des troubles de la fonction immunitaire et de la pigmentation, et ce gène est fréquemment étudié dans le contexte de l’invasion tumorale et des métastases via la libération de vésicules extracellulaires et des programmes de trafic membranaire.
Rab 27a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAB27A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAB27A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAB27A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAB27A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.