Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rab 26: sc-411810-ACT

RAB26 code pour Rab26, une petite GTPase de la famille Rab qui régule le trafic membranaire en coordonnant les événements de bourgeonnement, de transport et de fusion des vésicules. Rab26 a été associé à des processus sécrétoires et endolysosomaux, notamment l’acheminement des cargos via des voies de recyclage et de dégradation ainsi que la modulation de la dynamique vésiculaire dans des types cellulaires spécialisés. En influençant l’organisation spatiale de la machinerie de trafic et l’identité des compartiments, RAB26 peut affecter la signalisation et l’homéostasie cellulaire. Un trafic dépendant des GTPases Rab dérégulé a été associé à des phénotypes neurodégénératifs, au comportement des cellules cancéreuses et à des dysfonctionnements immunitaires, ce qui fait de RAB26 un nœud pertinent pour étudier les perturbations de voies dans des modèles de maladie.

Rab 26 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAB26 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rab 26 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAB26 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAB26, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rab 26. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAB26 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rab 26 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rab 26 dans les cellules tumorales présentant une expression de RAB26 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.