Rab 25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404721

Übersicht

RAB25 kodiert Rab25, eine kleine GTPase der Rab-Familie, die das Abschnüren, den Transport und das Recycling von Vesikeln reguliert und insbesondere beim Transport zur apikalen Membran sowie bei der endosomalen Sortierung eine wichtige Rolle spielt. Durch die Kontrolle der Frachtzustellung und des Rezeptorrecyclings beeinflusst Rab25 die epitheliale Polarität, den Integrin-Umsatz und die Signalweiterleitung über Signalwege, die mit Zelladhäsion und Migration verknüpft sind. Eine veränderte RAB25-Expression und die zugehörige Trafficking-Maschinerie wurden in einem kontextabhängigen Zusammenhang mit der Tumorbiologie gebracht, unter anderem mit Auswirkungen auf Invasivität und metabolische Anpassung. Als Knotenpunkt des vesikulären Transports ist Rab25 auch relevant für die Untersuchung von Membrandynamik, Tight-Junction-Organisation und rezeptorvermittelter Signalübertragung in polarisierten humanen Zellen.

Das Rab 25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAB25-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAB25-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAB25 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 25-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAB25-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 25-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAB25-Exone abzielen, die für die Rab 25-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAB25-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab 25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAB25-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 25 HDR-Plasmid (h) und Rab 25 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAB25-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAB25-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.