Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rab 11A Double Nickase Plasmid (h): sc-400617-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab 11A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab 11A Double-Nickase-Plasmid (h) und Rab 11A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAB11A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab 11A: sc-166523
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab 11A Double Nickase Plasmid (h) | sc-400617-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 11A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400617-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB11A kodiert die kleine GTPase Rab11A, einen zentralen Regulator der Dynamik recycelnder Endosomen und des Membrantransports, der endozytisches Recycling, Vesikelabschnürung und die Lieferung von Fracht zur Plasmamembran koordiniert. Rab11A wirkt zusammen mit Rab11‑Familien‑Interaktionsproteinen und dem Exocyst‑Komplex, um Rezeptorrecycling, Integrin‑Turnover, polarisierten Transport und die Abszission während der Zytokinese zu steuern, und ist damit mit Zytoskelett‑Remodelling und Zellmigration verknüpft. Über seine Funktionen bei der Sortierung und dem Transport von Signalrezeptoren und Komponenten von Zellkontakten beeinflusst Rab11A Signalwege, die die epitheliale Polarität und die Reaktionsfähigkeit auf Wachstumsfaktoren prägen. Eine fehlregulierte Rab11A‑abhängige Transportmaschinerie wurde in Krebsmodellen mit verändertem Invasions‑ und Metastasierungsverhalten in Verbindung gebracht; zudem wird ein gestörtes endosomales Recycling auch bei Mechanismen neurodegenerativer und infektiöser Erkrankungen diskutiert.
Rab 11A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAB11A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAB11A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAB11A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAB11A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.