Particules Lentivirales d'Activation (h) R7BP: sc-415971-LAC

RGS7BP code pour R7BP, une protéine d’ancrage membranaire et partenaire régulateur des protéines de la famille RGS7 ayant une activité d’activation de la GTPase, qui module l’amplitude et la cinétique de la signalisation des RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) dans les neurones et d’autres cellules excitables. En favorisant la localisation à la membrane plasmique et la stabilité des complexes RGS7–Gβ5, R7BP influence les voies couplées à Gi/o et la modulation en aval de l’AMPc, de l’activité des canaux ioniques et de la transmission synaptique. Ce rôle d’échafaudage relie RGS7BP à des processus neurophysiologiques, notamment la terminaison du signal et la désensibilisation des récepteurs, ce qui est pertinent pour l’étude de phénotypes neurologiques et neuropsychiatriques lorsque la régulation des réseaux de RCPG est perturbée. Une compartimentalisation altérée dépendante de RGS7BP peut également affecter la communication croisée des voies de signalisation qui gouverne l’excitabilité cellulaire et les réponses adaptatives.

Les particules d'activation lentivirales R7BP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RGS7BP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales R7BP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RGS7BP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de R7BP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RGS7BP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.