Partículas Lentivirales de Activación (h) R2: sc-400624-LAC

El gen humano **RRM2** codifica la subunidad pequeña R2 de la **ribonucleótido reductasa**, una enzima esencial que convierte ribonucleótidos en desoxirribonucleótidos para sostener la síntesis y la reparación del ADN. R2 aporta un centro generador de radicales que permite la actividad catalítica junto con la subunidad R1, vinculando la abundancia de RRM2 con la progresión de la fase S, la estabilidad de las horquillas de replicación y el mantenimiento del genoma. La expresión de RRM2 está regulada por redes de señalización del ciclo celular y de daño en el ADN, incluido el control de los puntos de control (checkpoints) y las respuestas al estrés replicativo que modulan la homeostasis del pool de dNTP. La actividad desregulada de RRM2 se estudia con frecuencia en el contexto de programas proliferativos, la capacidad de reparación del ADN y los mecanismos de resistencia al estrés genotóxico en biología del cáncer.

Las partículas de activación lentiviral R2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RRM2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral R2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RRM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de R2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RRM2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.