Plasmide Double Nickase (m2) R-Spondin3: sc-428439-NIC-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m2) R-Spondin3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide R-Spondin3 Double Nickase (m2) et le plasmide R-Spondin3 Double Nickase (m22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Rspo3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m2) R-Spondin3 | sc-428439-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Chez la souris, Rspo3 code la R‑Spondine 3, un ligand matricellulaire sécrété qui potentialise la signalisation canonique WNT/β‑caténine en se liant aux récepteurs LGR et en neutralisant le complexe de ligases ubiquitine ZNRF3/RNF43 afin de stabiliser les récepteurs Frizzled/LRP à la surface cellulaire. Il joue des rôles centraux dans la morphogenèse embryonnaire, le développement vasculaire, la mise en place des tissus et le maintien des cellules souches/progénitrices, en s’intégrant aux signaux de la matrice extracellulaire pour façonner les programmes épithélio‑mésenchymateux et angiogéniques. Une activité dérégulée de l’axe RSPO3–WNT a été impliquée dans une organogenèse aberrante et un remodelage tissulaire pathologique, notamment dans des contextes associés à la tumorigenèse et à la fibrose. Rspo3 est donc largement utilisé dans des modèles murins et des systèmes in vitro pour étudier la régulation de la voie WNT, la signalisation de niche et les réseaux géniques du développement, au moyen de l’édition du génome, d’essais rapporteurs et d’études sur organoïdes ou de différenciation endothéliale.
R-Spondin3 Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Rspo3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Rspo3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Rspo3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Rspo3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.