Plasmide CRISPR/Cas9 KO R-Spondin2 (m): sc-433683

Présentation

Rspo2 code pour la R-spondine 2, un ligand matricellulaire sécrété qui potentialise la signalisation canonique WNT/β-caténine en se liant aux récepteurs LGR et en neutralisant le renouvellement des récepteurs Frizzled médié par RNF43/ZNRF3. Dans les tissus murins, la R-spondine 2 contribue à la mise en place des patrons de développement, au maintien des cellules souches/progénitrices et à la signalisation épithélio-mésenchymateuse, influençant des processus tels que l’organogenèse, le remodelage tissulaire et la régénération. Son activité s’articule avec des voies qui contrôlent la prolifération et la différenciation, notamment les programmes transcriptionnels induits par WNT et des gradients de morphogènes dépendants de la matrice extracellulaire. Une signalisation RSPO2–WNT dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes de croissance et de différenciation tissulaires aberrantes, notamment dans des modèles d’anomalies du développement et d’activation de voies oncogéniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO R-Spondin2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rspo2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rspo2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rspo2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine R-Spondin2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rspo2 pour l'étude de la signalisation de R-Spondin2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rspo2 essentiels à la fonction de R-Spondin2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rspo2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le R-Spondin2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le R-Spondin2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rspo2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le R-Spondin2 plasmide HDR (m) et le R-Spondin2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rspo2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rspo2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.