Plásmido CRISPR de Activación (h) quiescin Q6: sc-405059-ACT

El gen humano QSOX1 codifica quiescina Q6, una oxidasa de sulfhidrilos dependiente de FAD que cataliza la formación de enlaces disulfuro y contribuye al plegamiento oxidativo de proteínas en la vía secretora y en la matriz extracelular. Al generar enlaces disulfuro y producir peróxido de hidrógeno como subproducto, QSOX1 influye en la homeostasis redox, la maduración proteica y los procesos de remodelación de la matriz que afectan la adhesión y la migración celular. La actividad de QSOX1 se ha vinculado a cambios en la organización del microambiente tumoral, la remodelación fibrótica y contextos de señalización inflamatoria, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la proteostasis extracelular asociada a enfermedades. Su expresión y función también son relevantes para vías adaptativas al estrés que coordinan la secreción, el tráfico RE/vía secretora y la señalización dependiente del estado redox.

quiescin Q6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de QSOX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

quiescin Q6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus QSOX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional QSOX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de quiescin Q6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo QSOX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de quiescin Q6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía quiescin Q6 en células tumorales con expresión de QSOX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.