QTRT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413456

Übersicht

QTRT1 kodiert die katalytische Untereinheit der tRNA-Guanin-Transglycosylase, eines Enzyms, das für die Queuosin-Modifikation an der Wobble-Position bestimmter zytosolischer tRNAs erforderlich ist. Dieser tRNA-Editierungsprozess unterstützt die Genauigkeit und Effizienz der Translation und beeinflusst dadurch die codonvoreingenommene Proteinsynthese, die Proteostase sowie den weiteren RNA-Stoffwechsel. Über seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der Homöostase von tRNA-Modifikationen verknüpft QTRT1 die nährstoffabhängige Queuin-Rettung (Salvage) mit zellulären Stressantworten und Signalwegen der Wachstumskontrolle. Eine Fehlregulation von tRNA-Modifikationen und der Translationsmaschinerie wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Mitochondrienfunktion, die Empfindlichkeit gegenüber oxidativem Stress und proliferative Programme relevant sind, was QTRT1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Biologie von RNA-Modifikationen macht.

Das QTRT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des QTRT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des QTRT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von QTRT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die QTRT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von QTRT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der QTRT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf QTRT1-Exone abzielen, die für die QTRT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere QTRT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom QTRT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom QTRT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des QTRT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das QTRT1 HDR-Plasmid (h) und QTRT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von QTRT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten QTRT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.