Plasmide CRISPR/Cas9 KO QTRT1 (h): sc-413456

Présentation

QTRT1 code la sous-unité catalytique de la transglycosylase tRNA-guanine, une enzyme nécessaire à la modification par la quéuosine à la position wobble de certains ARNt cytosoliques. Ce processus d’édition des ARNt soutient la précision et l’efficacité de la traduction, en influençant la synthèse protéique biaisée par l’usage des codons, la protéostasie et, plus largement, le métabolisme des ARN. Par son rôle dans le maintien de l’homéostasie des modifications des ARNt, QTRT1 relie le recyclage (salvage) de la queuine dépendant des nutriments aux réponses cellulaires au stress et aux voies de contrôle de la croissance. La dérégulation des modifications des ARNt et de la machinerie de traduction a été associée à des phénotypes pertinents pour la fonction mitochondriale, la sensibilité au stress oxydatif et les programmes prolifératifs, faisant de QTRT1 un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie des modifications de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO QTRT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène QTRT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du QTRT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert QTRT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine QTRT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en QTRT1 pour l'étude de la signalisation de QTRT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de QTRT1 essentiels à la fonction de QTRT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de QTRT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le QTRT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le QTRT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus QTRT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le QTRT1 plasmide HDR (h) et le QTRT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie QTRT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles QTRT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.