Plasmide CRISPR/Cas9 KO QPCT (h): sc-405768

Présentation

QPCT (glutaminyl-peptide cyclotransférase) est une enzyme sécrétée et associée à l’appareil de Golgi qui catalyse la formation de pyroglutamate en N-terminal sur des protéines et des peptides, une modification post-traductionnelle pouvant influencer la stabilité vis-à-vis de la protéolyse, les interactions avec les récepteurs et la bioactivité des peptides. En convertissant des résidus N-terminaux de glutamine ou de glutamate en pyroglutamate, QPCT contribue à la maturation des protéines au sein de la voie sécrétoire et module les contextes de signalisation extracellulaire. Cette activité recoupe des voies impliquées dans la maturation des hormones peptidiques et des neuropeptides, la protéostasie extracellulaire et la sécrétion régulée. Des altérations de la pyroglutamylation ont été associées dans la littérature à l’agrégation protéique et à des modifications de peptides liées à la neurodégénérescence, ce qui fait de QPCT un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de la biologie des protéoformes impliquées dans les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO QPCT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène QPCT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du QPCT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert QPCT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine QPCT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en QPCT pour l'étude de la signalisation de QPCT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de QPCT essentiels à la fonction de QPCT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de QPCT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le QPCT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le QPCT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus QPCT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le QPCT plasmide HDR (h) et le QPCT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie QPCT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles QPCT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.