Particules Lentivirales d'Activation (m) Qa-1: sc-420781-LAC

Le gène murin H2-T23 code Qa-1, une molécule non classique du CMH de classe I qui présente un répertoire peptidique restreint et module la reconnaissance immunitaire en interagissant avec des récepteurs inhibiteurs et activateurs des cellules NK ainsi que de certains sous-ensembles de lymphocytes T CD8. Qa-1 contribue à la tolérance immunitaire et à la surveillance en façonnant les réponses cytotoxiques et en influençant la dynamique de présentation antigénique au sein de la voie plus large du CMH de classe I. Une expression altérée de Qa-1/H2-T23 a été associée à des modifications du tonus inflammatoire, à l’échappement immunitaire et à la régulation des réponses auto-réactives, ce qui la rend pertinente pour l’étude des infections, de l’immunologie des tumeurs et de phénotypes de type auto-immun. En tant que régulateur modèle de la présentation antigénique, Qa-1 est fréquemment utilisée pour analyser le dialogue croisé NK–T, la signalisation immunitaire induite par le stress et des mécanismes de type « checkpoint » immunitaire chez la souris.

Les particules d'activation lentivirales Qa-1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de H2-T23 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Qa-1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription H2-T23, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Qa-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif H2-T23 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.