Plasmide CRISPR/Cas9 KO pyridoxal phosphatase (h): sc-406810

Présentation

PDXP code une phosphatase du pyridoxal, une enzyme cytosolique qui hydrolyse le pyridoxal-5′-phosphate (PLP), la forme active de la vitamine B6, contribuant ainsi au contrôle cellulaire de la disponibilité du PLP et à l’homéostasie des vitamères de la B6. Étant donné que le PLP est un cofacteur essentiel pour de nombreuses aminotransférases, décarboxylases et enzymes impliquées dans le métabolisme à un carbone et le métabolisme lié aux neurotransmetteurs, l’activité de PDXP peut influencer indirectement le renouvellement des acides aminés et, plus largement, les flux métaboliques. Par son rôle dans le maintien de l’équilibre des cofacteurs, PDXP est pertinente pour les études portant sur l’adaptation métabolique, les voies liées au rédox et la régulation enzyme–cofacteur. Des altérations du métabolisme dépendant du PLP ont été impliquées dans divers contextes pertinents pour les maladies, faisant de PDXP une cible utile pour des investigations mécanistiques des phénotypes cellulaires associés au métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO pyridoxal phosphatase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDXP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDXP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDXP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine pyridoxal phosphatase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDXP pour l'étude de la signalisation de pyridoxal phosphatase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDXP essentiels à la fonction de pyridoxal phosphatase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDXP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le pyridoxal phosphatase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le pyridoxal phosphatase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDXP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le pyridoxal phosphatase plasmide HDR (h) et le pyridoxal phosphatase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDXP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDXP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.