Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pygopus 1 (h): sc-405936
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Pygopus 1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Pygopus 1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Pygopus 1 Antibody (3E1): sc-517079
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pygopus 1 (h) | sc-405936 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PYGO1 code pour Pygopus 1, un coactivateur nucléaire qui couple les complexes transcriptionnels β-caténine/TCF à la chromatine dans la signalisation Wnt canonique. Grâce à des interactions avec BCL9/9L et la machinerie de modification des histones, Pygopus 1 soutient des programmes transcriptionnels qui contrôlent la spécification du destin cellulaire, la prolifération et l’homéostasie épithéliale. Les sorties Wnt dépendantes de PYGO1 recoupent des processus tels que le maintien d’un état de type « stem » et la différenciation, et une dérégulation de cette voie est fréquemment impliquée dans des états transcriptionnels oncogéniques et des perturbations du développement. Ces caractéristiques font de PYGO1 une cible utile pour disséquer l’expression génique induite par Wnt et l’engagement de la chromatine dans des modèles cellulaires humains.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pygopus 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PYGO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PYGO1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PYGO1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pygopus 1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PYGO1 pour l'étude de la signalisation de Pygopus 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PYGO1 essentiels à la fonction de Pygopus 1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PYGO1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Pygopus 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pygopus 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PYGO1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Pygopus 1 plasmide HDR (h) et le Pygopus 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PYGO1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PYGO1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.