Plasmide Double Nickase (h) PYGB: sc-406294-NIC

PYGB code l’isoforme cérébrale de la glycogène phosphorylase, une enzyme limitante de la vitesse qui catalyse la dégradation du glycogène en glucose-1-phosphate, soutenant une adaptation métabolique rapide en situation de demande énergétique. En contrôlant la mobilisation du glycogène intracellulaire, PYGB influence le flux glycolytique et relie la disponibilité des nutriments aux réponses cellulaires au stress, à l’équilibre redox et à l’homéostasie de l’ATP. L’activité de PYGB est liée à des voies qui régissent le métabolisme des glucides et peut moduler la résilience cellulaire en conditions d’hypoxie ou de limitation nutritionnelle. Une dérégulation du métabolisme du glycogène et une expression altérée de PYGB ont été associées à la reprogrammation métabolique observée dans des contextes neurologiques et dans d’autres tissus, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation énergétique.

PYGB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PYGB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PYGB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PYGB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PYGB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.