Plasmide Double Nickase (h) PXR: sc-400824-NIC

NR1I2 code le récepteur X des pregnanes (PXR), un récepteur nucléaire activé par des ligands qui agit comme un capteur de xénobiotiques reliant l’exposition aux substances chimiques au contrôle transcriptionnel des programmes de détoxification. Une fois activé, PXR forme un hétérodimère avec RXR et se fixe à des éléments de réponse afin de réguler des gènes impliqués dans le métabolisme et le transport de phase I/II, notamment CYP3A, les UGT et les transporteurs ABC, en s’intégrant aux voies de signalisation des acides biliaires, des lipides et de l’inflammation. Ce réseau régulateur influence l’homéostasie hépatique et intestinale et module les réponses cellulaires aux médicaments et aux substances chimiques environnementales. Une signalisation PXR dérégulée a été associée à la variabilité du métabolisme des médicaments et des interactions médicamenteuses, à des phénotypes cholestatiques et métaboliques, ainsi qu’à des effets dépendant du contexte dans des affections liées à l’inflammation et dans la biologie des cancers.

PXR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NR1I2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NR1I2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NR1I2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NR1I2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.