Plásmido Doble Nickase (h) PXDN: sc-404707-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PXDN consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PXDN (h) y el plásmido de doble nickasa PXDN (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PXDN. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PXDN Anticuerpo (2C11): sc-293408
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PXDN | sc-404707-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PXDN | sc-404707-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PXDN (peroxidasina) codifica una peroxidasa hemo que se localiza en la matriz extracelular y cataliza la formación de enlaces cruzados de sulfilimina en el colágeno IV, favoreciendo el ensamblaje de la membrana basal y la integridad tisular. Mediante química dependiente de peróxidos y el uso de haluros, PXDN contribuye a la homeostasis redox y a la remodelación de la matriz extracelular, influyendo en la adhesión y migración celular, así como en la morfogénesis del desarrollo. Las alteraciones en la actividad o la expresión de PXDN se han asociado con defectos en la arquitectura de la membrana basal y con fenotipos oculares y vasculares, lo que la hace relevante para estudios de fibrosis, remodelación asociada a la inflamación y respuestas al estrés oxidativo. Por ello, PXDN se investiga ampliamente en vías que vinculan la estabilidad de la matriz extracelular con la señalización redox y las interacciones epitelio–mesénquima.
PXDN El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PXDN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PXDN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PXDN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PXDN alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.