Ptx3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402766-ACT

PTX3 kodiert Pentraxin 3 (Ptx3), ein lösliches Mustererkennungsmolekül aus der Familie der langen Pentraxine, das in der angeborenen Immunität und der Regulation der extrazellulären Matrix eine Rolle spielt. Ptx3 wird durch entzündliche Signale wie IL‑1, TNF und mikrobielle Produkte rasch induziert und trägt zur Kontrolle der Komplementaktivierung, zur Opsonierung sowie zur Modulation der Leukozytenrekrutierung im Rahmen von NF‑κB‑ und zytokingesteuerten Antworten bei. Darüber hinaus ist es an der Gewebeumgestaltung beteiligt, indem es Matrixkomponenten und Wachstumsfaktoren bindet und so entzündliche Signalwege mit Angiogenese und stromaler Organisation verknüpft. Eine fehlregulierte PTX3-Expression ist mit chronischen Entzündungszuständen, der Infektionsbiologie, kardiovaskulären und metabolischen Entzündungsprozessen sowie der Dynamik des tumorassoziierten Mikromilieus assoziiert, was seinen Einsatz als funktioneller Readout in immunologischen und krankheitsmodellbasierten Studien unterstützt.

Ptx3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ptx3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ptx3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ptx3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ptx3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.