Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTTG2 (h): sc-418367

Présentation

PTTG2 (pituitary tumor-transforming gene 2) code une protéine de type sécurine impliquée dans la régulation de la séparation des chromatides sœurs et de la progression du cycle cellulaire, avec des liens avec le contrôle du point de contrôle mitotique et le maintien de la stabilité génomique. En tant que composante de voies qui coordonnent l’entrée en anaphase et l’activité de protéases impliquées dans la ségrégation chromosomique, une expression altérée de PTTG2 peut influencer la prolifération, l’aneuploïdie et les réponses cellulaires au stress. Une dérégulation des membres de la famille PTTG a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs, ce qui justifie l’étude de PTTG2 dans des contextes de signalisation oncogénique et de phénotypes gouvernés par le cycle cellulaire. PTTG2 humain est donc pertinent pour des études mécanistiques de la mitose, des dommages associés à la réplication et des programmes transcriptionnels couplés à l’état prolifératif.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTTG2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTTG2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTTG2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTTG2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTTG2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTTG2 pour l'étude de la signalisation de PTTG2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTTG2 essentiels à la fonction de PTTG2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTTG2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTTG2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTTG2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTTG2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTTG2 plasmide HDR (h) et le PTTG2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTTG2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTTG2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.