Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTRF (h): sc-404669

Présentation

CAVIN1 code le facteur de libération des transcrits de la polymérase I (PTRF/cavin-1), un composant structural central des cavéoles qui coopère avec les cavéolines pour stabiliser ces invaginations en forme de flacon de la membrane plasmique. PTRF soutient la biogenèse et la dynamique des cavéoles, contribuant à l’homéostasie lipidique, à l’endocytose et à la mécanoprotection, et il influence les voies de transduction du signal organisées à la surface cellulaire. Par ses rôles dans l’organisation membranaire et le trafic, PTRF peut moduler la disponibilité des récepteurs et les réponses de signalisation en aval aux signaux mécaniques et métaboliques. Une dérégulation de CAVIN1/PTRF a été associée à une altération de la fonction cavéolaire dans la biologie du muscle et du tissu adipeux, et a été étudiée dans des contextes incluant des phénotypes liés à la lipodystrophie et le comportement des cellules tumorales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTRF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CAVIN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CAVIN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CAVIN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTRF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CAVIN1 pour l'étude de la signalisation de PTRF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CAVIN1 essentiels à la fonction de PTRF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CAVIN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTRF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTRF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CAVIN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTRF plasmide HDR (h) et le PTRF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CAVIN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CAVIN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.