Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTPN21: sc-407466-ACT

PTPN21 code une phosphatase à tyrosine non réceptrice qui module la signalisation dépendante de la phosphorylation et les interactions protéine–protéine dans de multiples contextes cellulaires. Elle a été impliquée dans la régulation du trafic des récepteurs et de la signalisation des kinases en aval, notamment via des interactions avec le cytosquelette et la machinerie endocytique qui influencent l’adhésion cellulaire, la migration et la croissance des neurites. Par ces fonctions, PTPN21 peut façonner les sorties de voies telles que MAPK/ERK et d’autres réseaux pilotés par la phosphotyrosine, qui coordonnent des programmes de croissance et de différenciation. Une activité de phosphatase dérégulée et une expression altérée de PTPN21 ont été associées à des phénotypes liés au cancer et à des processus pertinents en neurobiologie, ce qui en fait un nœud mécanistique utile pour des études de signalisation dans des cellules humaines.

PTPN21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPN21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTPN21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPN21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPN21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTPN21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPN21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTPN21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTPN21 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPN21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.