Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTP22 (h): sc-416917

Présentation

PTPN22 code la phosphatase cytosolique des tyrosines PTP22 (également appelée LYP), un régulateur négatif majeur de la signalisation des récepteurs antigéniques dans les cellules immunitaires. En déphosphorylant des intermédiaires de signalisation en aval du récepteur des lymphocytes T et de voies apparentées, PTP22 module les seuils d’activation des lymphocytes, la production de cytokines et la tolérance immunitaire. Les variations génétiques et l’altération de l’activité de PTPN22 sont fortement associées à la susceptibilité à de nombreuses maladies auto-immunes et inflammatoires, ce qui en fait un nœud largement étudié des réseaux de signalisation des immunorécepteurs. Les études fonctionnelles relient souvent PTP22 à des voies qui contrôlent l’équilibre proximal kinases/phosphatases, les programmes transcriptionnels dépendants de NFAT/NF-κB et la différenciation des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTP22 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTPN22 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTPN22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTPN22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTP22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTPN22 pour l'étude de la signalisation de PTP22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTPN22 essentiels à la fonction de PTP22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTPN22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTPN22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTP22 plasmide HDR (h) et le PTP22 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTPN22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTPN22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.