Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTP1B: sc-400732-ACT

PTPN1 code la protéine tyrosine phosphatase 1B (PTP1B), une phosphatase non réceptrice ancrée à la face cytosolique du réticulum endoplasmique, qui atténue la signalisation en déphosphorylant des récepteurs tyrosine kinase activés ainsi que leurs substrats associés. PTP1B module les voies des récepteurs de l’insuline et de la leptine et s’inscrit au carrefour de cascades déclenchées par des facteurs de croissance, notamment MAPK/ERK et PI3K–AKT, en façonnant des programmes cellulaires tels que l’homéostasie du glucose, la prolifération et la survie. Par son rôle dans l’ajustement fin des réseaux de signalisation dépendants de la phosphorylation, une activité altérée de PTPN1/PTP1B a été associée à des dérégulations métaboliques ainsi qu’à des contextes de signalisation oncogénique où l’activité des récepteurs et des kinases en aval est reconfigurée. Ces propriétés font de PTPN1 une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation des phosphotyrosines, du contrôle par rétroaction et du « cross-talk » entre voies dans des modèles cellulaires humains.

PTP1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTP1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTP1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTP1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTP1B dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.