PTPσ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402631-ACT

PTPRS kodiert die Protein-Tyrosinphosphatase Rezeptor-Typ S (PTPσ), eine rezeptorartige Phosphatase, die phosphorylierungsabhängige Signalübertragung an der Zelloberfläche moduliert. PTPσ ist an Zelladhäsion, Axonführung und synaptischer Organisation beteiligt, indem es Signale aus extrazellulärer Matrix und Proteoglykanen mit intrazellulären Kinasewegen verknüpft, die die Zytoskelettdynamik und das Neuritenauswachsen steuern. Im Nervensystem wurde eine veränderte PTPσ-Signalgebung mit beeinträchtigten Regenerationsantworten und synaptischem Remodeling in Verbindung gebracht, während in onkologischen Kontexten eine Fehlregulation von PTPRS mit gestörter Wachstumsfaktor-Signalgebung und Veränderungen der Zellmigration assoziiert ist. Diese biologischen Eigenschaften machen PTPRS zu einem nützlichen Ziel, um Phosphotyrosin-Signalnetzwerke zu untersuchen, die Differenzierung, Konnektivität und invasive Phänotypen in humanen Zellmodellen steuern.

PTPσ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTPRS-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PTPσ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTPRS-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTPRS-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PTPσ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTPRS-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PTPσ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PTPσ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTPRS-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.