Particules Lentivirales d'Activation (h) PTPκ: sc-402287-LAC

Le gène humain **PTPRK** code la protéine tyrosine phosphatase réceptrice de type K (PTPκ), une phosphatase transmembranaire qui module la phosphorylation sur tyrosine à la surface cellulaire et contribue à coordonner les signaux gouvernant l’adhésion cellule–cellule, l’intégrité des jonctions et l’organisation du cytosquelette. En régulant la signalisation des kinases réceptrices et non réceptrices, PTPκ influence des voies associées à l’inhibition de contact, à la fonction de barrière épithéliale et au comportement migratoire. Une activité ou une expression altérée de PTPRK a été associée à des réseaux de phosphorylation dérégulés dans des processus liés au cancer, notamment l’invasion et des modifications de l’architecture tissulaire. Ces caractéristiques font de PTPRK un nœud utile pour étudier comment la déphosphorylation médiée par les phosphatases façonne la dynamique de signalisation dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PTPκ (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PTPRK dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PTPκ (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PTPRK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PTPκ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PTPRK ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.