Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPε (h): sc-405606

Présentation

PTPRE code la protéine tyrosine phosphatase epsilon (PTPε), une phosphatase de type récepteur et cytosolique qui module la signalisation en déphosphorylant des résidus phosphotyrosine sur des substrats clés de kinases. PTPε participe au contrôle de l’activité des voies MAPK et JAK/STAT et peut ajuster la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase ainsi que des kinases de la famille Src, influençant la prolifération, l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que les seuils d’activation des cellules immunitaires. En façonnant des réseaux de signalisation dépendants de la phosphorylation, PTPε est étudiée dans des contextes de dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance, de signalisation inflammatoire et de reprogrammation de voies oncogéniques. La localisation et l’activité spécifiques de ses isoformes font de PTPRE un nœud utile pour disséquer le contrôle compartimenté de la signalisation cellulaire par les phosphatases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPε (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTPRE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTPRE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTPRE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTPε.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTPRE pour l'étude de la signalisation de PTPε, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTPRE essentiels à la fonction de PTPε
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTPRE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTPε plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTPε plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTPRE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTPε plasmide HDR (h) et le PTPε (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTPRE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTPRE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.