Plasmide CRISPR d'Activation (m) PTN: sc-422498-ACT

Le gène murin *Ptn* code la pléiotrophine (PTN), un facteur de croissance sécrété, se liant à l’héparine, qui signale via des protéoglycanes à héparane sulfate et des récepteurs phosphatases tyrosine des protéines afin de réguler la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que la croissance des neurites. L’activité de la PTN recoupe les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et de remodelage du cytosquelette, qui façonnent la structuration des tissus et la plasticité au cours du développement et de la réparation. Dans le système nerveux et les microenvironnements stromaux, une expression modifiée de PTN est associée à des changements de l’angiogenèse, de l’inflammation et des interactions avec la matrice extracellulaire, qui influencent des phénotypes pertinents pour la maladie. Ces propriétés font de *Ptn* une cible utile pour des études mécanistiques du neurodéveloppement, des réponses aux lésions et de la signalisation du microenvironnement dans des modèles murins.

PTN Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ptn sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTN Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ptn dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ptn, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ptn natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTN dans les cellules tumorales présentant une expression de Ptn silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.